问题描述：
[多选]
关于ABC法正确的是
A．制备酶标生物素
B．亲合素和HRP-B的浓度比不应高于4∶1
C．反应时，游离亲合素作为关键的桥联剂
D．先按比例将酶标生物素与亲合素混合成复合物，然后直接使用
E．需制备生物素化的抗体
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